Alat Rapid Antigen: Conocimiento básico de la detección de ácido nucleico - Parte 2

Alat Rapid Antigen: Saber la detección de ácidos nucleicos.

PCR cuantitativo de fluorescencia en tiempo real

La tecnología de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real se refiere al método de agregar grupos fluorescentes al sistema de reacción de PCR, utilizando señales fluorescentes para monitorear todo el proceso de PCR en tiempo real, y finalmente analizar cuantitativamente la plantilla desconocida a través de la curva estándar.

El principio de esta tecnología es marcar la sonda con grupo fluorescente, marque el grupo fluorescente R en el extremo 5 'y marque el grupo de enfriamiento Qen el extremo 3 '. Cuando no hay amplificación por PCR, el grupo fluorescente se detiene y no emite la fluorescencia debido a la distancia espacial cercana entre el grupo fluorescente y el grupo de enfriamiento; cuando se amplifica la PCR, la imprimación y la sonda específica marcada con fluorescencia se combinan en la plantilla al mismo tiempo. La posición de unión entre la sonda marcada con fluorescencia y la plantilla se encuentra entre los cebadores aguas arriba y hacia abajo. La sonda fluorescente se hidroliza utilizando la actividad de exonucleasa de 5 '3' de la enzima TAQ, y se libera el grupo fluorescente. Debido a que se separa del grupo de enfriamiento en el espacio, emite fluorescencia. La fluorescencia emitida puede detectarse por la sonda de fluorescencia, amplificada y detectada al mismo tiempo, a fin de realizar una detección de \"tiempo real\". Esta tecnología no es Solo se da cuenta del salto de PCR de semi cuantitativo a cuantitativo, pero también tiene las características de la especificidad fuerte, el alto grado de automatización y la resolución efectiva del problema de la contaminación de la PCR en comparación con la PCR convencional.

Detección de ADN de Strand Ramificado - BDNA

BDNA es un método para la detección cuantitativa del ARN de tipo 1 del VIH en plasma.bDNA se refiere a un fragmento de ADN sintético con cadenas laterales. Cada cadena lateral se puede etiquetar con un marcador emocionado. El ARN del VIH se libera de las partículas de virus por centrifugación, y luego se captura en los microporos con la sonda de captura

Específicamente se une a otra parte del ARN viral y también se une a la sonda preamplificada anteriormente. La última se hibridiza luego con la sonda de amplificación, la sonda BDNA. Los dos conjuntos de sondas de destino se unen específicamente a diferentes regiones de gen POT de complejos de oligonucleótidos virales de RNA.hivrna se forman en microporos. La señal de quimioluminiscencia se puede amplificar después de la incubación con un sustrato de quimioluminiscencia. Se cuantifica mediante intensidad luminosa, lo que es proporcional al contenido de HIVRNA en la muestra. BDNA no tiene una contaminación cruzada de los amplios, lo que es un gran progreso En comparación con PCR.BDNA tiene docenas de sondas que cubren todo el genoma, lo que puede detectar fácilmente algunas variantes de VIH, pero la sensibilidad no es tan sensible como la PCR. Mejorar la sensibilidad de BDNA es una dificultad importante.

Pasos de detección

El proceso de detección de la tecnología de detección cualitativa de ácido nucleico del VIH se divide en la extracción de ácido nucleico, la síntesis de transcripción inversa del ADNc, la reacción de amplificación de la PCR, el análisis cualitativo de los productos de amplificación, el resultado de resultados y el informe de finalización.